①試劑準備區:
儀器設備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和離心機等,加樣器、天平除了要專(zhuān)用外,還應有定期校準。試劑分裝應在超凈臺中進(jìn)行,擴增反應混合液應使用分子生物學(xué)級的,試劑制備好后應有質(zhì)檢:一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。
②標本制備區:
儀器設備主要有生物安全柜、加樣器、離心機、溫育儀、混勻器等
擴增區的主要儀器是核酸擴增儀、超凈臺、微量加樣器、離心機、可移動(dòng)紫外燈。擴增儀需進(jìn)行校準。并配備UPS電源,以防止由于電壓的波動(dòng),停電對擴增效果的影響。
④分析區:
本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等 潔凈實(shí)驗區的緩沖間部分面積不能超過(guò)主實(shí)驗室的八分之一,這是有規定的。PCR實(shí)驗室裝修工程的建議
1.實(shí)驗室空調通風(fēng)系統設計及壓力控制:
PCR實(shí)驗室并沒(méi)有嚴格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗區的壓力要求。
PCR實(shí)驗室設計的核心問(wèn)題是如何避免污染。在實(shí)際工作中,常見(jiàn)的有以下幾種污染類(lèi)型:擴增產(chǎn)物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染,實(shí)驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實(shí)驗結果必須作廢,需重新進(jìn)行實(shí)驗。所以發(fā)生污染后再?lài)@實(shí)驗室來(lái)尋找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是預防,而不是排除。
3. 試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入,造成污染;可以通過(guò)控制進(jìn)風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量達到正壓效果。
4. 核酸擴增室及產(chǎn)物分析室應呈微負壓,以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品,可以通過(guò)控制排風(fēng)風(fēng)量大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量達到負壓效果。
5. 在理想情況下,PCR實(shí)驗室緩沖間內,可設置正壓,使室內空氣不流向室外,室外空氣不流向室內。 PCR實(shí)驗室進(jìn)風(fēng)由原有中央空調控制,要求將中央空調風(fēng)口安裝到指定定點(diǎn),且高度為地面鋪裝好后2600mm處。
6. 如果使用熒光PCR儀,擴增室和產(chǎn)物分析室可以合并。若房間進(jìn)深允許,可設PCR內部專(zhuān)用走廊。需要指出的是在減少室內外空氣交換方面,緩沖間比專(zhuān)用走廊更有意義。
7. 各個(gè)區域之間應具備單向的實(shí)驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實(shí)驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實(shí)驗過(guò)程造成污染產(chǎn)生假性結果。