一、PCR實(shí)驗室設計基本配置
1.主體結構:
主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽(yáng)角均采用鋁合金50內圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問(wèn)題。結構牢固,線(xiàn)條簡(jiǎn)明,美觀(guān)大方,密封性好。
2.標準的三區分隔和氣壓調節:
將PCR過(guò)程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增檢測三個(gè)獨立的實(shí)驗區。整個(gè)區域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨立實(shí)驗區設置有緩沖區,同時(shí)各區通過(guò)氣壓調節,使整個(gè)PCR實(shí)驗過(guò)程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。
可打開(kāi)緩沖區Ⅰ,緩沖區Ⅱ和 PCR 擴增區的排風(fēng)扇往外排氣,在實(shí)驗區的外墻上和各扇門(mén)上都安裝有風(fēng)量可調的回風(fēng)口,空氣通過(guò)回風(fēng)口向室內換氣。
3.機械連鎖不銹鋼傳遞窗:
試劑和標本通過(guò)機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過(guò)程中不受污染(人物分流)。
4.消毒:
在三個(gè)實(shí)驗區和三個(gè)緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑準備區和標本制備區 還設置移動(dòng)紫外線(xiàn)燈,對實(shí)驗桌進(jìn)行局部消毒。
5.照明
燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點(diǎn)。
標準的PCR實(shí)驗室建設的過(guò)程中應注意:
①?lài)栏癜凑找幏犊茖W(xué)設計的安裝流程。
②規范的安裝流程和全面的服務(wù)流程。
③安裝前需要確定以下安裝條件,如:電源電壓,電源進(jìn)線(xiàn)位置,電話(huà)網(wǎng)絡(luò )線(xiàn)進(jìn)線(xiàn)位置,進(jìn)水水壓,最小安裝空間,地面平整度,通風(fēng)孔、進(jìn)水管和下水管的位置等,理想狀態(tài)的空間尺寸和通風(fēng)口尺寸。
6.地面
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進(jìn)行清掃,耐腐蝕。沒(méi)有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(至少800mm×800mm)接縫需要小于2mm。
二、PCR 實(shí)驗室設計基本要求
1.標準的PCR實(shí)驗室產(chǎn)物分析區或三個(gè)區域的最后一個(gè)區域(即擴增及產(chǎn)物分析區),空氣流向應由室外向室內,可通過(guò)在室內設置通風(fēng)櫥、排風(fēng)扇或其他排風(fēng)系統達到空氣流由室外向室內流動(dòng)的要求。
2.PCR 實(shí)驗室依據所使用的方法可分為試劑準備、標本制備、擴增、產(chǎn)物分析等三或四個(gè)區域。只是使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀、HIV病毒載量測定儀的PCR實(shí)驗室,有上述前面三個(gè)區域即可。各區域應完全獨立分隔,不應有任何的空氣直通。
3.PCR實(shí)驗室各區域儀器設備配備通常如下:
①標準的PCR實(shí)驗室標本制備區
儀器設備主要應有生物安全柜(最好為B2, 可避免提取核酸在柜內反復循環(huán),造成標本間交叉“污染”,出現假陽(yáng)性結果。此外還應配備加樣器、臺式高速離心機(冷凍及常溫)、臺式低速離心機、恒溫設備(水浴和/或干浴儀)、冰箱、混勻器和可移動(dòng)紫外燈等。
②標準的PCR實(shí)驗室試劑準備區:
儀器設備主要應有加樣器、冰箱、天平、低速離心機、混勻器、可移動(dòng)紫外燈等??墒褂贸瑑艄ぷ髋_作為試劑配制操作臺面。
③標準的PCR實(shí)驗室產(chǎn)物分析區:
本區所使用的儀器設備可能有加樣器、電泳儀(槽)、電轉印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標儀和洗板機等。
在理想情況下,PCR實(shí)驗室試劑準備、標本制備、擴增三個(gè)區域可設置緩沖間。在緩沖間內,可設置正壓,使室內空氣不流向室外,室外空氣不流向室內。
④標準的PCR實(shí)驗室擴增區
主要儀器就是核酸擴增熱循環(huán)儀(PCR儀,實(shí)時(shí)熒光或普通的)。熱循環(huán)儀的電源應專(zhuān)用,并配備一個(gè)穩壓電源或UPS,以防止由于電壓的波動(dòng)對擴增測定的影響。此外,根據工作需要,還可配備加樣器、超凈臺等。