細胞培養是一種無(wú)菌技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無(wú)微生物和不受其他有害因素的影響。為防止微生物污染和有害因素的影響，細胞培養室要求環(huán)境清潔，空氣清新、干燥、無(wú)塵。

細胞培養實(shí)驗室由無(wú)菌操作區、孵育區、制備區、儲藏區、清洗和消毒滅菌區6部分組成，這些區域的共同特點(diǎn)是房間要寬敞、明亮，地面要便于清潔、防滑，墻壁的質(zhì)地光滑堅硬，儀器設備布局合理，方便操作，避免交叉干擾，陳設簡(jiǎn)潔，便于清掃。

無(wú)菌操作區

無(wú)菌操作區是只限于細胞培養及其他無(wú)菌操作的區域，最好能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。在一般環(huán)境的空氣中，由于存在許多塵埃和雜菌，較易造成污染。

因此，接種工作要在空氣經(jīng)過(guò)滅菌的環(huán)境里進(jìn)行，小規模的無(wú)菌環(huán)境可利用超凈工作臺創(chuàng )造，大規模的需建無(wú)菌室。中綠能漢郁細胞制備實(shí)驗室工程案例

理想的無(wú)菌操作室應劃為三部分：

a) 更衣室―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

b) 緩沖間―位于更衣間與操作間之間，用于準備工作，還有防止污染的作用，以保證操作間的無(wú)菌環(huán)境，同時(shí)可放置恒溫培養箱以及必需的小型儀器。

c) 無(wú)菌操作間―無(wú)菌操作間則專(zhuān)用于無(wú)菌操作、細胞培養，其大小要適當，且其頂部不宜過(guò)高以保證紫外線(xiàn)的滅菌效果；墻壁光滑無(wú)死角以便清洗和消毒，無(wú)菌操作間容積小且為密閉式，一般無(wú)菌操作間的空氣消毒用紫外線(xiàn)燈，有的實(shí)驗室使用無(wú)臭氧紫外線(xiàn)消毒器或電子消毒滅菌器。中綠能漢郁細胞制備實(shí)驗室工程案例

凈化工作臺：操作簡(jiǎn)單，安裝方便，占用空間小且凈化效果很好。一般細菌培養室使用的凈化工作臺主要有兩種：a)側流式或稱(chēng)垂直式 b)外流式或稱(chēng)水平層流式。

孵育區

孵育區也稱(chēng)培養區，本區對無(wú)菌的要求雖不比無(wú)菌區嚴格，但仍需清潔無(wú)塵，因此也應設置在干擾少而非來(lái)往穿行的區域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進(jìn)行，后者費用高，一般實(shí)驗室多采用孵箱進(jìn)行工作。

制備區

制備區主要進(jìn)行培養液及有關(guān)培養用的液體等的制備。應設有試劑柜、器械柜、實(shí)驗臺和上水道、電源等，配備的主要儀器設備有水純化裝置、天平、微波爐、pH計、抽氣泵、電爐、培養分裝器、各種規格的培養瓶、培養皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶等。

在有天平、pH計、磁力拌器等設備下完成制備以后，應在無(wú)菌操作臺進(jìn)行過(guò)濾除菌。液體制備直接關(guān)系組織細胞養的成敗，因此必須嚴格無(wú)菌操作。

儲藏區

儲藏區主要存放各類(lèi)冰箱、干燥箱、液氮罐、無(wú)菌培養液、培養瓶等，此環(huán)境也需要清潔無(wú)塵。為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃。

細胞的凍存過(guò)程需要一系列程序降溫，一般為4 ℃下存放30min。轉放-20 ℃ 1 h，再轉入-80—-70℃過(guò)夜，之后才可以轉移到液氮內(-196℃)。因此儲存區必須配備冰箱、低溫冰箱、超低溫冰箱和液氮罐等設備。

清洗和消毒滅菌區

清潔和消毒滅菌區應與其他區域分開(kāi)，主要進(jìn)行所有細胞培養器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作，應備有高壓蒸汽滅菌鍋、細菌過(guò)濾設備、電熱干燥箱、消毒柜、排風(fēng)設備等。

細胞實(shí)驗室的建設要求

1、環(huán)境要求

溫度：儀器還是操作對溫度沒(méi)有特殊要求，維持舒適的溫度即可，比如18~26度。

濕度：過(guò)高的濕度會(huì )導致微生物的滋生，所以建議正常維持濕度在70%以下。

潔凈度：細胞實(shí)驗對潔凈區并沒(méi)有要求，細胞實(shí)驗里面只有細胞操作的時(shí)候要求無(wú)菌的環(huán)境，這時(shí)要求有局部的百級，通?？梢岳贸瑑襞_或者生物安全柜來(lái)實(shí)現，不過(guò)有時(shí)候為了有個(gè)更好一點(diǎn)的環(huán)境，減小超凈臺過(guò)濾器更換的時(shí)間，會(huì )維持室內的潔凈度，比如萬(wàn)級的潔凈度。

無(wú)菌無(wú)毒的操作環(huán)境和培養環(huán)境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。細胞培養對無(wú)菌環(huán)境要求很高，在細胞操作時(shí)，一般需要在100級空氣質(zhì)量條件下進(jìn)行。

在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身代謝物質(zhì)積累，可導致細胞中毒死亡。

照明：滿(mǎn)足實(shí)驗用的操作照度，通常在300LUX。

2、圍護結構要求

雖然實(shí)驗的操作對大環(huán)境沒(méi)有特殊要求，不過(guò)最好能有不產(chǎn)塵、不積塵的環(huán)境，能保證室內的清潔，并且易于清洗、不容易滋生微生物，所以在選擇維護結構時(shí)，選用彩鋼板、醫療板等潔凈板材是比較好的選擇，為了保證室內的通透性，可以布置密閉窗。

3、消毒

通常做完實(shí)驗后，都需要做終末消毒，室內需要安裝紫外燈，利用紫外燈對空氣和表面消毒。

細胞實(shí)驗室建設的注意事項

1、放置細胞培養的實(shí)驗室，空調需要能保證在冬季能制冷，特別是在密閉的環(huán)境里，培養箱等設備的散熱量會(huì )比較大，導致室內溫度過(guò)高。

2、如果設計成凈化實(shí)驗室，就需要按凈化實(shí)驗室的要求去做，如果做的細胞涉及到生物安全，則必須按照生物安全實(shí)驗室去設計，具體根據所做實(shí)驗的種類(lèi)，來(lái)確定實(shí)驗室的設計要求以及選擇的設備，是選擇超凈工作臺還是生物安全柜。

3、從事臨床細胞治療的，需要按照具體的規范要求建設。